获取目的基因的方法_范文大全

获取目的基因的方法

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问题一:获取目的基因的方法有哪些(详细)

..刚好学到

基因工程流程的第一步就是获得目的DNA片段,如何获得目的DNA片段就成为基因工程的关键问题。所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选

直接获取

1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了(基因组文库法 就是原教材中的用限制性内切酶直接获取。利用λ噬菌体载体构建基因组文库的一般操作程序如下:① 选用特定限制性内切酶, DNA进行部分酶解,得到DNA限制性片段② 选用适当的限制性内切酶酶解λ噬菌体载体DNA。③ 经适当处理,将基因组DNA限制性片段与λ噬菌体载体进行体外重组。④ 利用体外包装系统将重组体包装成完整的颗粒。⑤ 以重组噬菌体颗粒侵染大肠杆菌,形成大量噬菌斑,从而形成含有整个DNA的重组DNA群体,即文库。)经典解释

2.cDNA文库法(即原教材中提到的逆转录法)。cDNA文库,是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体。虽然可用基因组文库法来获取真核生物的目的基因,但是由于高等真核生物基因组DNA文库比其cDNA文库大得多,相关工作量同样大得多。更为重要的是,在真核生物基因组中合有大量的间隔序列或内含子,但在大肠杆菌等原核生物中没有类似序列的存在,所以大肠杆菌不能从真核生物基因的初级转录本中去除间隔序列,即不能表达真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在间隔序列(已在拼接过程中被去除),所以可以以真核生物成熟mRNA为模板,逆转录而成的cDNA可被大肠杆菌表达。因此,在基因工程中,cDNA文库法是从真核生物细胞中分离目的基因的常用方法。

3.直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”。这种方法有如用猎枪发射的散弹打鸟,无论哪一颗弹粒击中目标,都能把鸟打下来。鸟枪法的具体做法是:用限制酶(即限制性内切酶)将供体细胞中的DNA切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别转入不同的受体细胞,让供体细胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分别在受体细胞中大量复制(在遗传学中叫做扩增),从中找出含有目的基因的细胞,再用一骇的方法吧带有目的基因的DNA片段分离出来。如许多抗虫,抗病毒的基因都可以用上述方法获得。

用“鸟枪法”获取目的基因的优点是操作简便,缺点是工作量大,具有一定的盲目性。

人工合成

1.(主要是序列已知的基因)。主要是通过DNA自动合成仪,通过固相亚磷酸酰胺法合成,具体过程可以网上查询,反正是可以按照已知序列将核苷酸一个一个连接上去成为核苷酸序列,一般适于分子较小而不易获得的基因。对于大的基因一般是先用化学合成法合成引物,再利用引物获得目的基因。

2.聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研 究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情,用PCR几小时便可完成。PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑

他只是给目的基因的扩增

好累~.......余下全文>>

问题二:如何获取目的基因的原理及方法

如何获取目的基因的原理及方法

蛋​白​表​达​里​目​的​基​因​获​取​的​概​述

可以参考以下资料

如何获取目的基因的原理及方法_百度文库

wenku.baidu.com/...Y2uCCa

问题三:获取目的基因的常用方法是哪种? 20分

1.从基因文库中获取目的基因:将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌

的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。

当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因

在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基

因。

2.化学合成法。已知目的基因的核苷酸序列,可用DNA合成仪直接合成。

3.用PCR技术扩增技术提取。已知目的基因引物的序列,将整个DNA放入合成仪,因为只有当

引物与模板结合后DNA热聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中间的目的基因被大量扩增,

即被提取出来。

参考资料:zhidao.baidu.com/question/282052219.html

问题四:基因工程中目的基因的获取方法

鸟枪法 这种方法类似于鸟枪发射散弹。具体的做法是:用若干个合适的限制酶处理一个DNA分子,将它切成若干个DNA片段。这些片段的长度相当于或略大于一个基因。然后,将这些不同的DNA片段分别与适当的载体结合,形成重组DNA,再将它导入到相应的营养缺陷型细菌中。例如,当我们要提取维生素B1合成酶基因时,就要采用维生素B1的营养缺陷型细菌(它在不含维生素B1的培养基上不能生长)。把整合了不同DNA片段的营养缺陷型细菌分别接种到不含维生素B1的培养基上进行培养,只有那些整合了含有维生素B1合成酶基因的DNA片段的细菌才能正常生长。最后,把这些细菌中的这段DNA分离出来,再进行一系列的操作,就可以获得维生素B1合成酶基因。这种方法的缺点是专一性较差,分离出来的有时并非一个基因,但由于这种方法操作简便,所以现在仍然广泛采用。

反转录法 这种方法是在核糖体合成多肽的旺盛时期,首先把含有目的基因的mRNA的多聚核糖体提取出来,分离出mRNA,然后以mRNA为模板,用反转录酶合成一个互补的DNA,即cDNA单链,再以此单链为模板合成出互补链,就成为双链DNA分子。这种方法专一性强,但是操作过程比较麻烦,特别是mRNA很不稳定、生存时间短,所以要求的技术条件较高。

氨基酸序列合成法 这种方法是建立在DNA序列分析基础上的。当把一个基因的核苷酸序列搞清楚后,可以按图纸先合成一个个含少量(10~15个)核苷酸的DNA片段,再利用碱基对互补的关系使它们形成双链片段,然后用连接酶把双链片段逐个按顺序连接起来,使双链逐渐加长,最后得到一个完整的基因。这种方法专一性最强,现在用计算机自动控制的DNA合成仪,进行基因合成,使基因合成的效率大大提高。但是这种方法目前仅限于合成核苷酸对较少的一些简单基因,而且必须事先把它们的核苷酸序列搞清楚。对于许多复杂的、目前尚不知道核苷酸序列的基因就不能用这种方法合成,只能用前两种方法或其他方法分离或合成。这种合成基因的方法还有一个很大的优点,就是可以人工合成自然界不存在的新基因,使生物产生新的性状以满足人类需求。因此,这一方法今后将随着技术的不断改进而得到越来越广泛的应用。

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